U principiu basi di a sintesi di DNA

A sintesi di DNA chimicu hè basatu annantu à a strategia di sintesi in fase solida è a chimica di fosforamidite.Differenti da a sintesi di DNA biologicu, u materiale in a sintesi di DNA chimica hè DMT (4, 4-dimethoxytrityl) è deoxyriboxyside modificati da fosforamidite, cum'è mostra in Figura 1. A sintesi di DNA hè realizata nantu à u supportu solidu (pudemu offre diverse diColonna di sintesi Oligo), vale à dì CPG (vetru à pori cuntrullati) è PS (polistirene), è tutta a sintesi hè fatta nantu à unsintetizzatore di DNA/RNA, chì hè u nostru equipamentu principale, hà un mudellu diversu cum'è: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 è etc., a direzzione di sintesi hè da 3' à 5', è un nucleotide hè introduttu à u supportu solidu via unu. ciclu di sintesi.Un ciclu tipicu di sintesi cuntene quattru passi, Deprotection, Coupling, Capping and Oxidation (Figura 2).A Deprotection hè stallata per sguassà u gruppu DMT nantu à u supportu solidu o u gruppu 5' hydroxyl nantu à u nucleoside precedente, l'acidu tricloroaceticu 3% in dichloromethane hè utilizatu com'è reagentu di deprotection.Allora u deoxyriboxyside phosphoramidite mudificatu hè statu permessu di esposizione hydroxyl gruppu cù l 'assistenza di attivatore, vale à dì 5-ethylthiotetrazole o 4, 5-dicyanoimidazole, furmendu u phosphitetriester (III), è rializatu u passu Coupling.Un passu di Capping hè realizatu per bluccà u gruppu idrossile senza reazione durante u passu di accoppiamentu, per minimizzà a furmazione di sequenze di difetti indesiderati.Infine, u phosphitetriester inestabile (III) hè oxidatu à fosfortriester chimicu stabile (V) cù iodu cum'è oxidante in u presente di piridina.

L'ADN sintetizatu puderia esse clivatu da u supportu solidu per aminolisi, u gruppu 2-cyanoethyl prutettu nantu à u fosfortriester è l'amide nantu à a nucleobase hè scindata à u stessu tempu, i Plati di Sintesi è e Culonni di Sintesi in rack sò posti direttamente in a camera di reazione. di uEquipamentu di deprotezzione.L'ADN crudu puderia esse preparatu da HPLC, elettroforesi è OPC nantu à dumanda, pudemu ancu furnisceEquipamentu di purificazioneper u post-elaborazione.