Principi di sintesi di l'acidu nucleicu

A sintesi di l'acidu nucleicu hè realizatu utilizendu u metudu di trigliceridi di l'amida sialica in fase solida, induve l'estremità 3' di l'ADN hè immobilizzata nantu à un sustrato di fase solida è i nucleotidi sò aghjuntu in a direzzione 3' à 5' finu à chì u fragmentu di DNA desideratu hè sintetizatu. .Questu hè diffirenti da a sintesi di DNA per l'applicazione di DNA polimerasi.

L'estremità 3' di a prima basa hè immobilizzata nantu à CPG durante a sintesi, u 5'-OH di a prossima basa hè prutetta cù di-p-tolyl trityl DMT, u gruppu amminicu nantu à a basa hè prutettu cù l'acidu benzoicu è u 3'. -OH hè dopu attivatu cù un compostu aminofosfatatu.1 basa di u 5 5'-OH di 1 basa è 3'-OH di a basa successiva formanu un trigliceridi di fosfitu, chì hè dopu ossidatu cù iodu à un trigliceridi di fosfatatu, u protettivu nantu à a seconda basa 5'-OH hè eliminatu da agghiuncennu l'acidu dichloroacetic DM ciculi attraversu l'aghjunzione di a prossima basa, è dopu a sintesi, u prutettore nantu à u 5′-OH hè sguassatu cù un acidu debbuli U frammentu hè disconnected from the solid resin with concentrated ammonium hydroxide, u protectant hè eliminatu da a basa. cù l'idrossidu d'ammoniu cuncintratu sottu u riscaldamentu, l'idrossidu d'ammoniu hè eliminatu, u frammentu hè seccu in vacuum, è l'acidu nucleicu hè purificatu da cromatografia liquida o PAGE.

Passi di sintesi di Oligo

Deblocking

UU gruppu di prutezzione DMT 5 hè eliminatu aghjustendu a suluzione TCA.

Attivazione

Imbulighjate l'attivatore cù u monomeru oligonucleotide per furmà l'intermediu monomeru oligonucleotide attivu.

Accoppiamentu

U gruppu hydroxyl 5-terminale reagisce cù l'intermediatu oligonucleotide attivu in una reazione di condensazione anti-generativa per furmà un legame trigliceridiu fosfitu instabili.

Cappucciu 

L'aghjunzione di un agente di capping realiza una reazione di capping di acetilazione cù gruppi idrossilici eccessivi chì ùn sò micca implicati in a reazione di condensazione.

Ossidazione 

L'aghjunzione di a suluzione di iodu chì cuntene l'acqua reagisce cù ligami fosfiti instabili per l'ossidazione per furmà ligami stabili di trigliceridi di l'acidu fosforicu.

Scissione di Cyanoethyl

U pruduttu di l'acidu nucleicu dopu a sintesi, cù l'aghjuntu di suluzione DEA per caccià u gruppu cianoetil da u ligame di trigliceridi fosfatatu.

Cleaved & Deprotection

I frammenti di l'acidu nucleicu sò chjapputi da u trasportatore di a fase solida aghjunghjendu una suluzione d'idrossidu d'ammoniu cuncentrata è poi riscaldate per sguassà i gruppi protettivi da i ligami di l'idrogenu di e basi.